血清的常用問題及處理方法‖蒂科生物16010-159

1、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損？

 將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。長時間儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理？

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清（400g，1-2分鐘）或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里（一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾）。

大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

4、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀？

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

（1）解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

 （2）血清分裝凍存時，須規(guī)則搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一。

（3）勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沉淀。

（4）勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

（5）血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

（6）若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

5、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些

抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

6、為什么要熱滅活血清?

 加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。

在免疫學研究，培養(yǎng)ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

7、有必要做熱滅活嗎?

 實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認

為是微生物的分裂擴增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間，更確

保血清的質(zhì)量!

 8、細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎？如何處理？一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，

首先，

要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，

然后，

在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁

殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀

察細胞，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現(xiàn)可能與

以下幾種情況有關：

（1）細胞生長過老，破碎的細胞殘??；

（2）血清質(zhì)量不好，反復凍融的結果；

（3）配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細胞生長；

（4）配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱秒x心、過濾的方法去除這些黑點；

（5）培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

9、細胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成？

 （1）盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

（2）培養(yǎng)基無需37℃水浴。

（3）培養(yǎng)基保持*PH值7.0- 7.2。

（4）嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。

（5） 掌握細胞傳代的*時機，細胞切勿生長過老。

 使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補體成分，避免補體對細胞產(chǎn)生毒性作用。血清經(jīng)過滅活也會損失一些對細胞有利的成分，如生長因子，因此也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于培養(yǎng)，這樣做的前提是確認血清中不含補體成分。對于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細胞培養(yǎng)。

儲存條件：血清一般儲存于－20℃，同時應避免反復凍融。購買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。融化時現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時間存放，應盡快使用。

使用濃度：自從有了合成培養(yǎng)基，血清就是作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用，使用濃度一般為5－20％，zui常用是10％。過多血清容易使培養(yǎng)中的細胞發(fā)生變化，

特別是一些二倍體的無限細胞系，迅速生長之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。