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細(xì)胞不佳及病毒滴度受16000-044胎牛血清的影響表現(xiàn)
2017-10-20 瀏覽次數(shù)：1237
16000-044胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。不同批次血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用不同。大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中由16000-044胎牛血清引起的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不佳及病毒滴度的影響表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：
1、細(xì)胞生長(zhǎng)速度緩慢，長(zhǎng)滿單層時(shí)間長(zhǎng)；從同一細(xì)胞瓶中分出兩瓶細(xì)胞，用同一種培養(yǎng)液，分別加入10％的對(duì)照血清和待檢血清，在相同條件下培養(yǎng)72小時(shí)，會(huì)出現(xiàn)對(duì)照血清長(zhǎng)滿單層，而待檢血清大約只有60～70％，這種血清就不適合用來大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞。
2、細(xì)胞傳代后形態(tài)不正常，細(xì)胞狀態(tài)發(fā)生變化 ；由于血清的質(zhì)量問題，使原本狀態(tài)正常的細(xì)胞經(jīng)傳代后形態(tài)會(huì)變差；比如：細(xì)胞瓶里會(huì)出現(xiàn)一些蠕動(dòng)的小黑點(diǎn)（并非污染），或者細(xì)胞表面形成一層油狀覆蓋物；細(xì)胞的輪廓變得模糊，細(xì)胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒填充，從而影響細(xì)胞向四周擴(kuò)展生長(zhǎng)。
典型的例子就是：細(xì)胞瓶里會(huì)出現(xiàn)一些蠕動(dòng)的小黑點(diǎn)（并非污染），或者細(xì)胞表面形成一層油狀覆蓋物；細(xì)胞的輪廓變得模糊，細(xì)胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒填充，從而影響細(xì)胞向四周擴(kuò)展生長(zhǎng)。
3、細(xì)胞傳幾代后就出現(xiàn)脫壁現(xiàn)象，不能連續(xù)傳代 ；質(zhì)量較差的血清缺乏某種細(xì)胞的貼壁因子，會(huì)使細(xì)胞在傳代過程中逐漸喪失貼壁的能力。細(xì)胞會(huì)從正常的貼壁狀態(tài)，邊緣開始萎縮，上翹。觀察到的現(xiàn)象就是細(xì)胞表面不光滑，晃動(dòng)細(xì)胞瓶會(huì)看到細(xì)胞表面有絮狀物隨培養(yǎng)液波動(dòng)。隨著傳代次數(shù)增加，細(xì)胞萎縮的情況越來越嚴(yán)重，直到zui終*脫壁而死亡。
典型例子：血清中經(jīng)常會(huì)存在乙腦抗體，牛腹瀉病毒抗體等，如果存在這些抗體，就會(huì)把接進(jìn)去的病毒給中和掉。如果抗體滴度很高，病毒會(huì)被抗體*中和，就沒有病毒顆粒在細(xì)胞中增殖，所以會(huì)檢測(cè)不到病毒滴度。
這種情況給疫苗公司造成的損失是相當(dāng)大的，不產(chǎn)毒等于前面所做的那么多工作全部白費(fèi)，浪費(fèi)人力、物力，尤其是時(shí)間上的浪費(fèi)，從培養(yǎng)細(xì)胞開始到接病毒，到收液至少需要一兩個(gè)月，一旦出現(xiàn)不產(chǎn)毒的情況，那么這一兩月時(shí)間就白白浪費(fèi)掉了，這也是牛血清給疫苗企業(yè)造成的風(fēng)險(xiǎn)之一。
4、細(xì)胞長(zhǎng)的很好，致密的單層，狀態(tài)也很正常，但是接毒后細(xì)胞基本不發(fā)生病變，做滴度檢測(cè)幾乎測(cè)不出抗原滴度。這種情況也許是因?yàn)檠逯泻信c接種的病毒有同源的特異性抗體。比如血清中經(jīng)常會(huì)存在乙腦抗體，牛腹瀉病毒抗體等，如果存在這些抗體，就會(huì)把接進(jìn)去的病毒給中和掉。如果抗體滴度很高，病毒會(huì)被抗體*中和，就沒有病毒顆粒在細(xì)胞中增殖，所以會(huì)檢測(cè)不到病毒滴度。這種情況給疫苗企業(yè)造成的損失是相當(dāng)大的，不產(chǎn)毒等于前面所做的那么多工作全部白費(fèi)，浪費(fèi)人力、物力，尤其是時(shí)間上的浪費(fèi)，從培養(yǎng)細(xì)胞開始到接病毒，到收液至少需要一兩個(gè)月，一旦出現(xiàn)不產(chǎn)毒的情況，那么這一兩月時(shí)間就白白浪費(fèi)掉了，這也是牛血清給疫苗企業(yè)造成的風(fēng)險(xiǎn)之一。
5、細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)一般，產(chǎn)毒少、毒價(jià)低。這種情況比較常見，細(xì)胞是病毒的載體，由于血清質(zhì)量不好，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好，病毒就無法進(jìn)行正常的復(fù)制。并非所有病毒都不能復(fù)制，所以就造成疫苗的效價(jià)不夠，可能造成不合格產(chǎn)品。
16000-044胎牛血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。
1、細(xì)胞生長(zhǎng)速度緩慢，長(zhǎng)滿單層時(shí)間長(zhǎng)；從同一細(xì)胞瓶中分出兩瓶細(xì)胞，用同一種培養(yǎng)液，分別加入10％的對(duì)照血清和待檢血清，在相同條件下培養(yǎng)72小時(shí)，會(huì)出現(xiàn)對(duì)照血清長(zhǎng)滿單層，而待檢血清大約只有60～70％，這種血清就不適合用來大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞。
2、細(xì)胞傳代后形態(tài)不正常，細(xì)胞狀態(tài)發(fā)生變化 ；由于血清的質(zhì)量問題，使原本狀態(tài)正常的細(xì)胞經(jīng)傳代后形態(tài)會(huì)變差；比如：細(xì)胞瓶里會(huì)出現(xiàn)一些蠕動(dòng)的小黑點(diǎn)（并非污染），或者細(xì)胞表面形成一層油狀覆蓋物；細(xì)胞的輪廓變得模糊，細(xì)胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒填充，從而影響細(xì)胞向四周擴(kuò)展生長(zhǎng)。
典型的例子就是：細(xì)胞瓶里會(huì)出現(xiàn)一些蠕動(dòng)的小黑點(diǎn)（并非污染），或者細(xì)胞表面形成一層油狀覆蓋物；細(xì)胞的輪廓變得模糊，細(xì)胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒填充，從而影響細(xì)胞向四周擴(kuò)展生長(zhǎng)。
3、細(xì)胞傳幾代后就出現(xiàn)脫壁現(xiàn)象，不能連續(xù)傳代 ；質(zhì)量較差的血清缺乏某種細(xì)胞的貼壁因子，會(huì)使細(xì)胞在傳代過程中逐漸喪失貼壁的能力。細(xì)胞會(huì)從正常的貼壁狀態(tài)，邊緣開始萎縮，上翹。觀察到的現(xiàn)象就是細(xì)胞表面不光滑，晃動(dòng)細(xì)胞瓶會(huì)看到細(xì)胞表面有絮狀物隨培養(yǎng)液波動(dòng)。隨著傳代次數(shù)增加，細(xì)胞萎縮的情況越來越嚴(yán)重，直到zui終*脫壁而死亡。
典型例子：血清中經(jīng)常會(huì)存在乙腦抗體，牛腹瀉病毒抗體等，如果存在這些抗體，就會(huì)把接進(jìn)去的病毒給中和掉。如果抗體滴度很高，病毒會(huì)被抗體*中和，就沒有病毒顆粒在細(xì)胞中增殖，所以會(huì)檢測(cè)不到病毒滴度。
這種情況給疫苗公司造成的損失是相當(dāng)大的，不產(chǎn)毒等于前面所做的那么多工作全部白費(fèi)，浪費(fèi)人力、物力，尤其是時(shí)間上的浪費(fèi)，從培養(yǎng)細(xì)胞開始到接病毒，到收液至少需要一兩個(gè)月，一旦出現(xiàn)不產(chǎn)毒的情況，那么這一兩月時(shí)間就白白浪費(fèi)掉了，這也是牛血清給疫苗企業(yè)造成的風(fēng)險(xiǎn)之一。
4、細(xì)胞長(zhǎng)的很好，致密的單層，狀態(tài)也很正常，但是接毒后細(xì)胞基本不發(fā)生病變，做滴度檢測(cè)幾乎測(cè)不出抗原滴度。這種情況也許是因?yàn)檠逯泻信c接種的病毒有同源的特異性抗體。比如血清中經(jīng)常會(huì)存在乙腦抗體，牛腹瀉病毒抗體等，如果存在這些抗體，就會(huì)把接進(jìn)去的病毒給中和掉。如果抗體滴度很高，病毒會(huì)被抗體*中和，就沒有病毒顆粒在細(xì)胞中增殖，所以會(huì)檢測(cè)不到病毒滴度。這種情況給疫苗企業(yè)造成的損失是相當(dāng)大的，不產(chǎn)毒等于前面所做的那么多工作全部白費(fèi)，浪費(fèi)人力、物力，尤其是時(shí)間上的浪費(fèi)，從培養(yǎng)細(xì)胞開始到接病毒，到收液至少需要一兩個(gè)月，一旦出現(xiàn)不產(chǎn)毒的情況，那么這一兩月時(shí)間就白白浪費(fèi)掉了，這也是牛血清給疫苗企業(yè)造成的風(fēng)險(xiǎn)之一。
5、細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)一般，產(chǎn)毒少、毒價(jià)低。這種情況比較常見，細(xì)胞是病毒的載體，由于血清質(zhì)量不好，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好，病毒就無法進(jìn)行正常的復(fù)制。并非所有病毒都不能復(fù)制，所以就造成疫苗的效價(jià)不夠，可能造成不合格產(chǎn)品。
16000-044胎牛血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。
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