如何正確選擇細胞培養基

Hylone、HAKATA培養基，常備現貨，*

如何正確選擇細胞培養基

細胞培養是實驗室里zui常見和zui基本的實驗了，但卻不是zui簡單的。別小看細胞培養，這里可蘊含著大學問。有時候細胞狀態不好，轉染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細胞培養的因素很多，讓我們先從培養基和血清說起。 

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經典的培養基有很多種，HAKATA、HyClone、Sigma等。其中DMEM、RPMI-1640、MEM、DMEM/F12都是應用zui廣泛的培養基。其他如M199、IMDM、L15培養基等也用于某些細胞的培養。 

◆ MEM是由Eagle’s基礎培養基(BME)發展而來的，其中增加了組分的范圍及濃度。 

◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培養基是為小鼠成纖維細胞設計的，現在常用于貼壁細胞的培養。

DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。zui初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來為了某些細胞的生長需要，將葡萄糖含量又調整為4500 mg/L，這就是大家常說的低糖和高糖了。 

◆ aMEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸，它可廣泛應用于各種細胞類型，包括對營養成分要求苛刻的細胞。 

◆ Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的，現在也廣泛應用于克隆形成率的分析及原代培養。F12還可以與DMEM等體積混合使用，得到一種高濃度與成分多樣化相結合的產物，這種培養基已應用于許多原代培養及更難養的細胞系的培養。 

◆ RPMI-1640培養基是專為淋巴細胞培養而設計的，現在已廣泛應用于懸浮細胞的培養。 

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以前經常聽到有人問，這種細胞該用哪一種培養基呢?其實這個問題的答案可以很簡單，也可以好復雜。此話怎講?如果這種細胞是購自ATCC 或其他的細胞庫，那很簡單，問供應商就行了。或者找到相關的文獻，作為參考。 Invitrogen上有一個Cell Line Database的工具，也很好用。選擇你感興趣的細胞類型，它就會彈出推薦的培養基、血清和轉染試劑等，有時還有優化好的轉染步驟，很方便。Sigma上也有一個Media Expert，包括了培養基所有成分的功能描述、使用推介和參考文獻等，它還是一個解決問題能手，對于細胞培養中的常見問題，如細胞貼壁不好、培養基變色等，它都會列出可能的原因，并提供補救辦法。這個Expert果然不簡單!  但如果你是著手建立一種全新細胞的培養體系，根本找不到任何參考，那你就得花點時間自己試驗了。萬事開頭難嘛。因為沒有一個標準答案。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，shou選MEM做貼壁細胞培養、RPMI 1640做懸浮細胞培養會是一個好的開始。你也可以購買幾種培養基來，然后花大約兩周的時間做一個簡單的細胞生長實驗，來選擇其中zui適合的。有時候你會驚訝地發現你的zui佳培養條件與文獻報道的不同，就算是同一種培養條件，細胞的生長狀態也時好時壞，這是很正常的。因為試劑、水、不同批號的血清之間都存在著差異。要提高培養基的穩定性，可以從培養基和血清兩方面入手。 

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以前大部分實驗室都是用干粉培養基，但配制過程就較為繁瑣，要溶解、調pH值，過濾，過程中可能會產生一些濃度誤差，而且有些實驗室的水質并不理想，所以培養的效果會有差異。如果使用液體培養基，這種人為的誤差會減少，因為畢竟是大批量工業化生產的，批間差會很小。大家是不是感覺液體培養基會貴很多，以前是這樣，但現在非也。HyClone和Invitrogen都在國內建立了液體培養基的生產基地，生產和運輸成本大幅降低，所以現在的價格也只是50-60元/500ml，比干粉培養基貴不了多少，而且還幫你省了過濾器和時間。 

血清含有生長因子可促進細胞的繁殖，含有附著因子可促進細胞的貼壁，同時還具有抗胰酶活性。血清同時也是礦物質、脂類及激素的來源。zui常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和馬血清等。牛血清是按照采血時間的早晚來分類的。采血時間越早，營養物質越豐富，所含抗體也越少，因而胎牛血清適合要求高的細胞系和克隆化培養。由于瘋牛病的原因，到目前為止，我國政府仍然禁止從北美洲、歐洲和日本等地區進口牛血清，因此市面上的牛血清大多來自澳洲、南美洲，或是國產的。  而血清批次間的差別就是不可避免的，這種差異來源于不同的制備方法和除菌方法、動物的年齡差別及血清的儲存條件等，而且與取血動物的來源關系密切。不同的牧場、不同的氣候天氣及其他環境因素都可能影響血清的質量。因此選好了一種血清就要盡可能長期使用它。在需要更換時，也要盡量保持與原有的一批血清相似。

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現在很多公司都提供血清預留，你一旦選定了某個批次的血清，zui好備足一年的量，這樣可以避免很多麻煩。血清固然是細胞培養中*的成分，但正如上文所說，血清的批間差異大，更換血清時需要做大量的測試以取保替換的血清與原來的相似。而血清的供應也是必須要考慮的因素。由于氣候或瘋牛病的影響，說不定哪天血清就突然沒得賣了，那對實驗的影響可非同小可。另外，血清的價格也很昂貴，雖說現在也有便宜的國產血清，但是高品質的澳洲血清價格仍舊高起。因此，也有一些實驗室開始換用無血清培養基。 

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常備現貨液體培養基：