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        kg-1人急性骨髓性白血病細胞

        2020-05-22 瀏覽次數:629

         

        kg-1人急性骨髓性白血病細胞

        1) 來源:蒂科生物細胞庫

        2) 形態:懸浮 圓形

        3) 含量:>1x106 個/mL

        4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

        5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

        6) 運輸:順豐發貨

        培養條件:

        培養基:RPMI-1640+10% FBS(推薦HAKATA貨號:HN-FBS-500)

        溫度:37℃     氣相:95%空氣,5%二氧化碳

        傳代

        1.用75%酒精噴灑整個培養瓶消毒,將其平躺置于培養箱中進行1-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養基(以T25培養瓶為例)并置于細胞培養箱中培養,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代,一般2到3天換一次液

        2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳代,傳代比例為1:2到1:4

        3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預熱,倒掉培養瓶中的培養基,往培養瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預熱好的胰酶,置于37°孵育消化(diyi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為jia消化時間,記錄jia消化時間,以便于下次消化),消化好后加入3ml*培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養基重懸細胞,進行傳代。

        凍存:

        建議使用本公司無血清細胞凍存液貨號:H-W-100,用4度保存的冷凍液直接重懸細胞,不能預熱后使用。

        保存條件:液氮存儲

        溫馨提示(常見問題,處理方式

        T25瓶為例;

        1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養基終止消化,可使用血球計數板計數。

        2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。

        3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

         

        對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

        1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

        2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

        3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

        4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

         

        注:diyi次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。

        細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存

         

        蒂科生物論文基金獎勵方法

        獎勵對象:

        使用HAKATA系列產品(HAKATA全系列:血清、凍存液、試劑、細胞株等)培養細胞并在中文核心期刊雜志或SCI期刊雜志發表文章,且文章中材料和方法欄中標注我公司品牌名或公司名(英文:HAKATA或Shanghai Chuanqiu Biotechnology Co.,Ltd, China,中文:HAKATA或蒂科生物)

        該獎勵方案長期有效,歡迎大家與我們分享獲得成果的喜悅!

        kg-1人急性骨髓性白血病細胞

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