胎牛血清的這些指標(biāo)你都知道嗎？

牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。
1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
2. 提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。
4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

胎牛血清都有哪些重要的指標(biāo)

一、內(nèi)毒素
內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的*成分。當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時(shí)，才表現(xiàn)其毒性。內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡，血清中內(nèi)毒素含量越低，對(duì)細(xì)胞毒性越小，越利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代；內(nèi)毒素含量過(guò)高，會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)胞提前老化。國(guó)際上規(guī)定，胎牛血清的級(jí)別，應(yīng)以內(nèi)毒素水平的高低來(lái)確定，其中，特級(jí)胎牛血清的內(nèi)毒素應(yīng)<10EU/ml

二、血紅蛋白含量
胎牛血清的顏色會(huì)根據(jù)血紅蛋白含量的不同表現(xiàn)出黃色、淡黃色、橘紅色、微紅色等。細(xì)胞培養(yǎng)用血清的標(biāo)準(zhǔn)是血紅蛋白含量不高于20mg/dl，顏色越紅，數(shù)值越高；反之，數(shù)值越低。實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無(wú)直接影響。這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。

三、總蛋白含量
胎牛血清的總蛋白含量一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高，說(shuō)明采血的牛齡偏大，不是胎牛；數(shù)值偏低，表明血清可能摻水了。

四、pH值
根據(jù)藥典，胎牛血清的pH值在7.0-8.0之間，并沒(méi)有什么具體依據(jù)把進(jìn)口血清和國(guó)產(chǎn)血清用7.5這個(gè)分界線界定。

五、滲透壓
胎牛血清滲透壓的檢測(cè)一般采用冰點(diǎn)法，滲透壓摩爾濃度（mOsmol/kg）：280-360之間

六、微生物
包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體等。隨著各個(gè)品牌血清生產(chǎn)條件的改善提高，細(xì)菌、霉菌等“大型"微生物幾乎能100%控制。支原體通過(guò)0.1um3次無(wú)菌過(guò)濾去除。如CellMax胎牛血清，3次0.1um無(wú)菌過(guò)濾以后，又通過(guò)培養(yǎng)法和DNA染色法進(jìn)行支原體檢測(cè)，結(jié)果均呈現(xiàn)陰性才會(huì)放行銷(xiāo)售。關(guān)于噬菌體主要是生產(chǎn)環(huán)境過(guò)程中帶入，又無(wú)法過(guò)濾，很難*清除，但對(duì)血清質(zhì)量影響不大，不過(guò)對(duì)于工業(yè)生產(chǎn)的客戶來(lái)說(shuō)，往往會(huì)采用γ照射的胎牛血清來(lái)避免噬菌體。

七、免疫球蛋白
免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血時(shí)的牛齡情況，新生牛血清容易產(chǎn)生IgM，IgG的含量也偏高；胎牛血清不含IgM，IgG的含量也較低。可以通過(guò)血清蛋白電泳SDS檢測(cè)。
低IgG的胎牛血清推薦適用于抗體生產(chǎn)及相關(guān)領(lǐng)域。

有下列情況者，對(duì)血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選：
1.養(yǎng)干細(xì)胞時(shí)，干細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素非常敏感，如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時(shí)，干細(xì)胞很容易死亡。很多使用者，在血清在試用前，就通過(guò)提早審核該批次《檢測(cè)報(bào)告》，以決定是否入圍進(jìn)行試用。
2.養(yǎng)免疫細(xì)胞時(shí)，過(guò)高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子，抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。
3.基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)的細(xì)胞要盡可能保持其原始狀態(tài)，任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑，都會(huì)讓后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果“失之毫厘，謬以千里"。在準(zhǔn)備血清和其他試劑時(shí)，選擇極低的內(nèi)毒素（最好≤1EU/ml），對(duì)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要；
4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細(xì)胞轉(zhuǎn)染，或者肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細(xì)胞的擴(kuò)增，這些都需要挑選好的血清給細(xì)胞以有力支持。因此，挑選更低的內(nèi)毒素，是保證實(shí)驗(yàn)順利的第一步。
5.實(shí)驗(yàn)室有些細(xì)胞，需要長(zhǎng)期培養(yǎng)、長(zhǎng)期凍存，或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的，血清會(huì)經(jīng)常或長(zhǎng)時(shí)間作用于細(xì)胞。為保證細(xì)胞的健康，都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清，以避免內(nèi)毒素長(zhǎng)久對(duì)細(xì)胞的毒性影響。
總之，血清中內(nèi)毒素含量過(guò)高，更容易導(dǎo)致細(xì)胞“亞健康"，造成數(shù)據(jù)不準(zhǔn)，或細(xì)胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡，導(dǎo)致試驗(yàn)中斷失敗。血清中的內(nèi)毒素越低越好。
全球細(xì)胞培養(yǎng)學(xué)會(huì)均依據(jù)內(nèi)毒素對(duì)血清的品質(zhì)進(jìn)行分級(jí)和命名。
內(nèi)毒素含量越低的血清，級(jí)別就越高，以胎牛血清為例：
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí)，此血清為特級(jí)胎牛血清；
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml，≤ 25EU/ml時(shí)，此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清；
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時(shí)，此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清；