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技術文章 / article
做實驗選擇原代細胞還是細胞株?
2022-03-01 瀏覽次數:1698
各種已被命名和經過細胞生物學鑒定的細胞系或細胞株,都是一些形態比較均一、生長增殖比較穩定的和生物性狀清楚的細胞群。因此凡符合上述情況的細胞群也可給以相應的名稱,即文獻中常稱之為已鑒定的細胞(Certified Cells)。已鑒定的細胞可用于各種實驗研究和生產生物制品,當前世界上已建的各種細胞系(株)已難勝數。
體外培養細胞的種類和命名
體外培養細胞的名稱,隨培養細胞技術的發展和細胞種類的增多而演變。最早采用的名稱為細胞株(Cell strain),以后又出現細胞系(Cell Line)一詞,兩者曾一度混用致概念不明確,導致文獻中也很混亂。
名詞的由來
細胞株(cell strain)最初為W.Earle(1940)所采用,他把自己建立的小鼠結締組織L系稱為“株",1951年,George Gey把其建立的人體宮頸癌細胞Hela系稱為“株"。1954年,White另外使用了“系"來稱呼A Carrel培養的雞胚心臟的細胞群,細胞系(cell line)由此產生,之后這兩個名詞長期混用。
即使在1979年國際組織培養協會專業術語委員會頒布“專業名詞建議"和1984年在寧波召開的全國動物組織和細胞培養會議通過“動物細胞、組織和器官培養技術中的一些術語的譯名和解釋"之后,到目前為止國內對這兩個名詞的使用仍是混亂的,不僅在商品名中混用,在專業文獻中亦有混用現象。
現將細胞系和細胞株區分如下:
1、細胞系(Cell Line):原代培養物經傳代成功即成細胞系,由原先存在于原代培養物中的細胞世系(Lineage of Cells)所組成。
2、細胞株(Cell Strain):通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。如果不能繼續傳代或傳代數有限,稱為有限細胞株(finitecell strain);如果可以連續傳代,稱為連續細胞株(continuous cell strain)。對于人類腫瘤細胞,在體外培養半年以上,生長穩定,并連續傳代的即可稱為連續性株或系。
因此,細胞系泛指可傳代的細胞,細胞株是具有特殊性質的細胞系。
(一)初代培養
初代培養又稱原代培養,即直接從體內取出的細胞、組織和器官進行的第一次的培養物。一旦已進行傳代培養(Subculture)的細胞,便不再稱為初代培養,而改稱為細胞系。
(二)細胞系
初代培養物開始第一次傳代培養后的細胞,即稱之為細胞系。如細胞系的生存期有限,則稱之為有限細胞系(Finite Cell Line);已獲無限繁殖能力能持續生存的細胞系,稱連續細胞系或無限細胞系(Infinite Cell Line)。
無限細胞系大多已發生異倍化,具異倍體核型,有的可能已成為惡性細胞,因此本質上已是發生轉化的細胞系。無限細胞系有的只有永生性(或不死性),但仍保留接觸抑制和無異體接種致癌性;有的不僅有永生性,異體接種也有致瘤性,說明已惡性化。
這兩種不同性質的無限細胞系,在國內外文獻中對這些名詞的應用上也常不十分嚴格。為概念上的明確,對有惡性的無限細胞系采用“惡性轉化細胞系"一詞表示可能更妥。而對那些只具永生性而無惡性的細胞系,則用無限細胞系或轉化細胞系即可。如 NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均屬這類細胞系。
由某一細胞系分離出來的、在性狀上與原細胞系不同的細胞系,稱該細胞系的亞系(Subline)。
(三)克隆細胞株
從一個經過生物學鑒定的細胞系用單細胞分離培養或通過篩選的方法,單細胞增殖形成的細胞群,稱細胞株。再由原細胞株進一步分離培養出與原株性狀不同的細胞群,亦可稱之為亞株(Substrain)
(四)二倍體細胞
細胞群染色體數目具有與原供體二倍細胞染色體數相同或基本相同(2n細胞占75%或80%以上)的細胞群,稱二倍體細胞培養。如僅數目相同,而核型不同的即染色體形態有改變者為假二倍體。二倍體細胞在正常情況下具有限生命期,故屬有限細胞系。但隨供體年齡和組織細胞的不同,二倍體細胞的壽命長短各異。
人胚肺成纖維細胞可傳50代土10代,人胚腎只有8~10代,人胚神經膠質細胞15~30代;如從老齡個體取可傳50則細胞生存期更短。由不同年齡供體取材建立的二倍體細胞系可供研究衰老之用。
為保持二倍體細胞能長期被利用,一般在初代或2~5代即大量凍存作為原種(Stook Cells),用時再進行繁殖,用后再繼續凍存,可供長期使用或延緩細胞的衰老。
做實驗選擇原代細胞還是細胞株?
原代細胞:從體內直接分離的細胞。功能、代謝、形態類似體內細胞的特點,因此原代細胞適用于分析單個細胞形態、代謝、功能。原代細胞的缺點是:細胞均一性差,因為從特定組織取下來的原代細胞可能處于不同的發育時期。增殖能力差、培養時間受限、轉染效率低。
細胞株:原代細胞經過長期培養和篩選后,功能、代謝、形態趨于均一化的無限增殖細胞。適用于整體水平實驗。優點是:容易培養、好感染、干擾因素少、便于同步化、實驗好操作。缺點是:與整體差別大、可能喪失原代細胞的特性,細胞株在長期傳代過程中遺傳物質發生變異。所以同一個學名的細胞株,有可能有*不同的形態、代謝、功能表現。不同代數的細胞株,性質也可能*不同。
原代細胞由于轉染效率低這個問題,應用受到了限制。自從腺病毒誕生后,因為其強大的感染能力,克服了原代細胞難感染的問題,使得原代細胞的使用變得更加簡單。由于細胞實驗后,很多時候需要做到動物體內,由于原代細胞有體內細胞的特點,為了細胞實驗和動物體內實驗的結果更加趨向一致性,因此用原代細胞來進行細胞實驗更值得考慮。